Human Mesenchymal Stem Cell Meedium
一、产品基本信息
二、产品简介
Xeno-Free 人间充质干细胞培养基是一款无外源动物成分的 人间充质干细胞培养基。可应用于人骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传 代培养，并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循 ISO9001 体系, 并符合 GMP 指导原则。 Xeno-Free 人间充质干细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、 微量元素，细胞因子等。
三、产品特性
无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
全程无血清生产，极大降低批次间差异。
可用于原代分离，且培养过程无需包被培养板。
扩增效率高，24h 左右增殖翻倍，节省培养时间。
内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平
四、产品内容
五、相关产品
无血清细胞冻存液（治疗级）（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006）
人脐带间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003）
人脂肪间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004）
细胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024）
六、实验准备 人间充质干细胞培养基配制
1.1. 37℃快速解冻人间充质干细胞添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为 10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存 于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。
1.2. 将添加剂以 10%比例加入到人间充质干细胞基础培养基中，混匀，即为人间充质干细胞培养基 （AC-1001003）。混合后培养基可在 2-8℃ 稳定储存 2-3 周，不建议使用已配制超过 3 周的 培养基。
1.3. 人间充质干细胞培养基可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分 离、扩增与传代培养。
七、操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作) 1. hMSC 细胞复苏(10cm dish)
1.1. 从液氮中取出冻存的 hMSC 细胞，迅速将冻存管放入 37℃水浴快速融解。
1.2. 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入 5 mL 预温的人间充质干细胞培养基 （AC-1001003）。
1.3. 1200rpm 离心 3 min，吸掉上清，加入 10ml 人间充质干细胞培养基重悬细胞。
1.4. 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO2的 37℃恒温细胞培养 箱中培养 24 小时后观察细胞状态。
1.5. 24h 后更换新鲜人间充质干细胞培养基继续培养，每 2-3 天更换培养液。
2. hMSC 细胞传代培养
2.1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到 90%，即可传代。
2.2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入细胞消化液（AC-1001024） 使之完全覆盖皿/瓶底。
2.3. 室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-4 分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
2.4. 加入消化液 2 倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并 轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
2.5. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min。
2.6. 弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4 比例传代，或按 1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于 37℃，5%CO2 培养箱中培养。
注意：细胞传代所需的时间：2-4 天。5 代及之前的细胞，生长速度较快。5 代以后的细胞，生 长速度稍缓。
3. hMSC 细胞冻存
3.1. 细胞达到 90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS 清洗一次。
3.2. 加入细胞消化液（AC-1001024）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min 分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3.3. 加入消化液 2 倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并 轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
3.4. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min，吸掉上清。
3.5. 加入适量无血清细胞冻存液（治疗级）（AC-1001006），调整细胞冻存密度在 1×106 cells/mL
3.6. 左右，每支冻存管分装 1.5-2ml。
3.7. 直接放入-80℃，24h 后转入液氮中长期保存。
八、细胞形态图
九、质量控制
