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Xeno-Free人间充质干细胞培养基 Xeno-Free人间充质干细胞培养基

Xeno-Free人间充质干细胞培养基

产品编号:AC-1001003
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                  Xeno-Free 人间充质干细胞培养基

                                                                         Human Mesenchymal Stem Cell Meedium

一、产品基本信息

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二、产品简介

Xeno-Free 人间充质干细胞培养基一款无外源动物成分的 人间充质干细胞培养基。可应用于人骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传 代培养,并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准,生产过程遵循 ISO9001 体系, 并符合 GMP 指导原则。 Xeno-Free 人间充质干细胞培养基主要成分:氨基酸,维生素、无机盐、白蛋白,转铁蛋白、胰岛素、 微量元素,细胞因子等。

三、产品特性

无外源动物蛋白成分,大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

全程无血清生产,极大降低批次间差异。

可用于原代分离,且培养过程无需包被培养板。

扩增效率高,24h 左右增殖翻倍,节省培养时间。

内毒素<0.06EU/ml,远低于中国药典水平

四、产品内容

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五、相关产品

无血清细胞冻存液(治疗级)(Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006

人脐带间充质干细胞(Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003

人脂肪间充质干细胞(Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004

细胞消化液(Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024

六、实验准备 人间充质干细胞培养基配制

1.1. 37℃快速解冻人间充质干细胞添加剂,快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质,时间大致为 10min。待添加剂融化后摇匀,分装或直接按比例添加到基础培养基中,分装后添加剂立即储存 -20℃-80℃,避免反复冻融 。

1.2. 将添加剂以 10%比例加入到人间充质干细胞基础培养基混匀,即为人间充质干细胞培养基 (AC-1001003)。混合后培养基可在 2-8℃ 稳定储存 2-3 周,不建议使用已配制超过 3 周的 培养基。

1.3. 人间充质干细胞培养基可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分 离、扩增与传代培养。

七、操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作) 1. hMSC 细胞复苏(10cm dish)

1.1. 从液氮中取出冻存的 hMSC 细胞,迅速将冻存管放入 37℃水浴快速融解。

1.2. 在生物安全柜或超净台中,将解冻后的细胞悬液缓慢加入 5 mL 预温的人间充质干细胞培养基 (AC-1001003)

1.3. 1200rpm 离心 3 min,吸掉上清,加入 10ml 人间充质干细胞培养基重悬细胞。

1.4. 将细胞均匀铺到培养皿中,水平十字振动培养皿使细胞均匀分布,5% CO237℃恒温细胞培养 箱中培养 24 小时后观察细胞状态。

1.5. 24h 后更换新鲜人间充质干细胞培养基继续培养,每 2-3 天更换培养液。

2. hMSC 细胞传代培养

2.1. 在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到 90%,即可传代。

2.2. 在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入 PBS 溶液清洗一次,加入细胞消化液(AC-1001024) 使之完全覆盖皿/瓶底。

2.3. 室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-4 分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

2.4. 加入消化液 2 倍体积的人间充质干细胞培养基,用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并 轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

2.5. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中,1200 rpm 离心 3 min

2.6. 弃上清,加入人间充质干细胞培养基,重悬细胞,计数。1:3-1:4 比例传代,或按 1-2x104 cells/cm2 传代,均匀铺在培养皿/瓶中,置于 37℃5%CO2 培养箱中培养。

注意:细胞传代所需的时间:2-4 天。5 代及之前的细胞,生长速度较快。5 代以后的细胞,生 长速度稍缓。

3. hMSC 细胞冻存

3.1. 细胞达到 90%汇合度, 吸掉原有培养基PBS 清洗一次。

3.2. 加入细胞消化液(AC-1001024)使之完全覆盖皿/瓶底,室温孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min 分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

3.3. 加入消化液 2 倍体积的人间充质干细胞培养基,用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并 轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

3.4. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中,1200 rpm 离心 3 min,吸掉上清。

3.5. 加入适量无血清细胞冻存液(治疗级)(AC-1001006),调整细胞冻存密度在 1×106 cells/mL

3.6. 左右,每支冻存管分装 1.5-2ml。

3.7. 直接放入-80℃,24h 后转入液氮中长期保存。

八、细胞形态图

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九、质量控制

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