产品简介
2x Blood Direct PCR SuperMix专为扩增全血中的DNA而研发，无需对血样预处理或提取DNA，即可直接扩增。SuperMix中含有经修饰的高保真DNA聚合酶，对血液样本中存在的PCR抑制剂具有很高的耐受性（体系中全血可高达40%）。
质量控制
经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温(15-25°C)存放两周，无明显活性改变。
适用范围
EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝方法保存的新鲜或冷冻血样。
未加抗凝剂的血样和干血。
培养的动物细胞等。
建议模板用量 (以50 μl 反应体系为例)
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模板种类 |
处理方法 |
推荐用量 |
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人血 |
无需处理 |
1-2 µl |
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鼠血 |
无需处理 |
1-2 µl |
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禽血 |
用水或TE稀释后扩增 |
2~50倍稀释后1 µl |
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干血 |
将干血或带血样品（如纸张等），溶于50 μl水或TE中，室温孵育15分钟（其间振荡混合2~3次），95~100°C加热15分钟，离心取上清作为模板。 |
1-5 µl |
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培养细胞
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离心除净培养基后，用适量体积的水或TE悬浮细胞沉淀，以细胞悬液作为模板。
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10-105个细胞 |
PCR性能
以人血液为模板，可很好地扩增≤6 kb的DNA片段。PCR延伸速度可采用4 kb/min。
PCR产物
使用本产品扩增得到的产物为平端，可直接克隆于pToy-Blunt 载体中，也可以在末端加A后克隆到pToy-T 系列载体中。
应用实例
以下举例仅供参考，实际反应需根据模板、引物、片段长度等变量，设定最佳反应条件。
1. 反应体系配制:
用2x Blood Direct PCR SuperMix产品，以人血液为模板，扩增1 kb片段，反应体系为50 µl(如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量)。
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组成成分 |
用量 |
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Template |
2 μl |
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Forward Primer (10 μM) |
1 μl |
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Reverse Primer (10 μM) |
1 μl |
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2× Blood Direct PCR SuperMix |
25 μl |
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ddH2O |
up to 50 μl |
2. PCR反应条件的设置：
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94°C |
2 min |
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98°C |
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30 - 35 cycles |
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Tm-5°C |
10 sec |
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72°C |
15 sec/kb |
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72°C |
5 min |
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3. 结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。 
注意事项
1. 使用时彻底化冻,混匀。
2. 扩增产物可能由于变性的血红蛋白而呈现浑浊，可离心后取上清电泳，也可以直接点样电泳。
3. 如需进行后续实验（如克隆、测序等），需对产物进行纯化。
