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direct PCR小鼠基因分型 direct PCR小鼠基因分型

direct PCR小鼠基因分型

产品编号:SZ6003
本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定而研制,能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA,消化时间仅需15分钟,无需抽提与纯化,可直接将消化产物作为模板进行PCR扩增。试剂盒中配有高扩增兼容性的2xDet PCR SuperMix (Dye+),PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,扩增产物可直接点样电泳。PCR产物的3’端带”A”,可进行TA克隆。
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产品简介
本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定而研制,能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA,消化时间仅需15分钟,无需抽提与纯化,可直接将消化产物作为模板进行PCR扩增。试剂盒中配有高扩增兼容性的2xDet PCR SuperMix (Dye+),PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,扩增产物可直接点样电泳。PCR产物的3’端带”A”,可进行TA克隆。
建议组织用量(以50 μl反应体系为例)
  • 3~5 mm小鼠尾尖
  • 5~10 mm2小鼠耳朵
  • 1~2个小鼠脚趾
质量控制
25 μl PCR反应体系中,以1 μl小鼠尾巴裂解产物为模板,扩增小鼠gapdh基因,30个循环后取产物5 μl进行1%琼脂糖凝胶电泳,可见有单一的2 kb条带。
操作步骤
1 按小鼠数量配制组织消化液,每个样本采用40 μl DS1与10ul DS2混合。现用现配。
2. 向每个含有样本的EP管中加入50 μl新鲜组织消化液,55°C水浴/金属浴中消化15 min。组织消化时,务必将组织完全浸没于消化液中。消化完成后,组织外观上仍然完整,但足量的基因组DNA已 经释放,不影响后续的PCR实验。
3. 将样本置于95°C水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶。12000 rpm离心5min,取上清作为PCR模板。消化后的上清可于-20℃保存三个月。
应用实例


* 最好于低温下配制,试剂全部加好后,瞬时离心,将所有试剂收集到管底。
*结果检测:反应结束后取5 µl反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。

注意事项
1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2. 提取物4°C可保存3个月, -20°C可保存6个月。
实验流程图

 

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