产品简介
本产品采用独特的裂解缓冲液体系，能够快速的从多种植物样本中释放出基因组DNA，用于 PCR 反应，无需进行基因组的纯化，因此特别适合大规模转基因植株鉴定、植物基因分型等。试剂盒中配有高扩增兼容性的2xDet PCR SuperMix (Dye+)，PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。PCR产物的3’端带”A”，可进行TA克隆。
质量控制
25 μlPCR反应体系中，以1μl多种植物叶片裂解产物为模板，扩增rbcL基因，35个循环后取产物5 μl进行1%琼脂糖凝胶电泳，可见有单一的1.3 kb 条带。
操作步骤
1. 可使用打孔器(或剪刀)剪取直径 5-7 mm 叶片（3-5 mg）组织置于1.5 ml的离心管中，若选用成熟的叶片，请避免使用叶片主脉部位组织。
2. 加入50 μl Buffer LS1，吹吸或涡旋混匀。
3. 95℃孵育10 min。
4. 加入50 μl Buffer LS2，混匀后直接作为模板进行PCR或置于-20度保存。
5 可选步骤:对于多糖多酚的植物样本，可以选择再加入100μl溶液LS3于样品管中，全速离心30秒，取上清作为模板扩增。
推荐PCR体系与条件：
1. 反应体系配制：以50 µl体系为例(如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量)。
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组成成分 |
用量 |
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Template |
1-2 μl |
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Forward Primer (10 μM) |
0.5 μl |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.5μl |
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2×Det PCR SuperMix |
12.5 μl |
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ddH2O |
up to 25 μl |
* 试剂全部加好后，混匀后瞬时离心，将所有试剂收集到管底。
2. PCR反应条件的设置：
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94°C |
2 min |
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94°C |
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30-35 cycles |
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Tm-5°C |
10 sec |
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72°C |
30 sec/kb |
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72°C |
5 min |
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3. 结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
注意事项:
1. 样品避免反复冻融。
2. 使用时试剂彻底化冻,混匀。
3. 对于不易裂解组织（如蜡纸叶片），可以延长95度的孵育时间至30min。
4. 如非特异性扩增较多，可调整退火温度或适当增减模板用量。
5. 提取物2-8℃可保存3个月，-20℃可保存6个月
6. 若扩增效果不佳，可能裂解混合液中抑制物过多，可以减少模板用量以及以适当增加 PCR 的循环数。
