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DNA转染试剂(效果同2000) DNA转染试剂(效果同2000)

DNA转染试剂(效果同2000)

产品编号:sc401
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产品概述
    本产品是一种具有高效转染、低毒性的阳离子聚合物核酸转染试剂,适用于大多数的真核细胞,可以用于原代细胞和悬浮细胞体外转染。本品为经过优化的纳米材料,它不仅改善了转染试剂存在细胞毒性的问题,对于大多数细胞,转染72小时后不更换培养基无明显毒性;同时在血清存在的条件下,也能达到高效的转染效果。



操作步骤
(以24孔板为例,如使用其它规格培养板/皿,请参照转染试剂建议使用剂量标准进行调整。为了获得最佳转染效果,请根据实验优化使用剂量
  1. 接种细胞
贴壁细胞:转染前一天,接种适量细胞(0.5 ~ 2×105)接种至500 μl不含抗生素的培养基中,使转染时细胞密度达到70 ~ 80%汇合度。
悬浮细胞:转染前,接种4~ 8×105个/孔于500 μl不含抗生素的培养基中。
  1. 转染复合物配制(以24孔板每孔用量为参考)
  1. 取0.8 μg质粒DNA稀释于50 μl无血清培养基中,轻轻吹吸混匀;
  2. 取2 μl转染试剂稀释于50 μl无血清培养基中,充分混匀,室温条件下孵育5分钟;
  3. 将a和b稀释的质粒和转染试剂混合,充分混匀(可涡旋振荡),室温条件下孵育20分钟;
  1. 转染细胞:将孵育20分钟后的转染复合物以100 μl/孔加入24孔板的细胞中,轻轻摇匀。
  2. 将细胞置于培养箱中培养18 ~ 48小时后检测细胞转染结果,此过程中可以不更换含转染复合物的培养基(对于敏感细胞建议在4 ~ 6小时后更换培养基)。
 
储存条件
4℃保存,1年有效;-20℃保存,2年以上有效;反复冻融不影响试剂的质量。
仅供科学研究使用

优化转染
    为了获得最佳的转染效果,降低其它因素的影响,需要根据具体实验情况,调整细胞接种密度、转染试剂/质粒DNA剂量来优化转染条件。敏感细胞可适当提高接种密度,确保细胞维持较高的增殖能力;转染试剂/质粒DNA剂量比例可在1:1至1:5之间调整。
 
转染试剂建议使用剂量
 
培养容器 细胞接种体积(ml) DNA用量(μg) 转染试剂用量(μl) 稀释体积(μl)
96孔板 0.1 0.2 0.5 25
24孔板 0.5 0.8 2.0 50
12孔板 1 1.6 1.0 100
6孔板 2 4.0 10 250
6 cm 5 8.0 20 500
10cm 15 24 60 1500
 
(为了获得最佳转染效果,请根据实验优化使用剂量)
 
注意事项
  1. 转染前必须确保细胞处于良好的生长状态;
  2. 为避免细胞出现死亡,培养基中尽量不要添加抗生素;
  3. 使用高纯度的质粒确保高效的转染效率;
  4. 使用前充分摇匀转染试剂(或涡旋振荡),使转染试剂分布均匀;
  5. 质粒和转染试剂稀释时,请使用无血清无抗生素的培养基(有条件可以使用Opti-MEM低血清培养基);

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